マウス骨髄腫細胞のクローン化と希少変異体の検出

要旨 培養されたマウス骨髄腫細胞は、PluznikとSachs（'65、'66）およびBradleyとMetcalf（'66）によって確立された方法の改良を使用してソフトアガー中でクローン化されました。すでに直線的な関係が存在し、播種された細胞数と生成されたコロニー数の間に相関がありました。MPC‐11細胞株の最適なクローン効率とコロニーの大きさを得るための条件が決定されました。マウス、ヒト、およびウサギ由来のフィーダー細胞と、マウス培養から得られた条件付き増殖培地は、コロニー形成に対して強化効果を示しました。クローン化された細胞による免疫グロブリン産生は、抗免疫グロブリン抗清液でクローンを重ねることによって検出されました。抗清液は、クローン効率やコロニーの大きさに悪影響を与えませんでした。プレートアッセイが免疫グロブリンを産生する細胞の希少変異体を確実に検出できることを示すため、再構成実験が行われました。プレートアッセイは、皿からクローンを回収し、マスサスペンション培養まで成長させた後の免疫グロブリン生産を研究することによって検証されました。これらの培養における免疫グロブリンの形成は、上澄み培地のOuchterlony免疫拡散によって、また放射性アミノ酸で細胞をインキュベートし、ポリアクリルアミドゲル上の細胞内および分泌された免疫グロブリンを分析することによって評価されました。