尿中のサイトメガロウイルス：サンドイッチハイブリダイゼーションによるウイルスDNAの検出

サイトメガロウイルス（CMV）特異的サンドイッチハイブリダイゼーションテストは、CMV DNAの二つの隣接したBamHI DNA断片を試薬として使用して構築されました。これらの断片は二つの異なるベクターにクローン化されました。一方の組換体はフィルターに固定され、もう一方は標識されたプローブでした。サンプル中に存在するCMV DNAは、フィルターに結合したDNAとプローブの両方にハイブリダイゼーションすることによってフィルターの標識を媒介しました。このサンドイッチハイブリダイゼーションテストは、尿中のCMV DNAの検出に適用されました。ウイルスからDNAは2%サルコシルによって放出され、2-ブタノール抽出とイソプロパノール沈殿によって濃縮され、変性され、最後にサンドイッチハイブリダイゼーションテストにかけられました。その結果、元のウイルスDNAの70〜90%を回収し、定量的ハイブリダイゼーション反応によって示すことができました。尿はCMVの検出可能性に影響を与えることなく、サルコシル中で室温で少なくとも2日間保存できました。このテストの臨床適用性は、CMVを排泄している4人の乳児からの尿サンプルを調べることによって評価されました。サンドイッチハイブリダイゼーションは、すべての標本におけるCMV DNAの存在を示しました。これらはもともと1mlあたり10(5)から10(8)のCMV DNA分子を含んでいました。