抗エリスロポエチン受容体モノクローナル抗体：エピトープマッピング、可溶性受容体の定量および可溶化された膜貫通受容体および受容体発現細胞の検出

エリスロポエチン受容体（EpoR）に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株は、マウスエリスロポエチン受容体の可溶性外因子（sEpoR）を抗原として確立されました。モノクローナル抗体1G3は変性したsEpoRに結合しました。ペプチドライブラリを用いたエピトープマッピングにより、1G3は6番目から11番目の位置にあるヘキサペプチド（LeuProAspProLysPhe）を含むアミノ末端領域を認識することが明らかになりました。このヘキサペプチド中のアミノ酸配列はマウス、ラット、およびヒトで同一であり、したがって1G3はこれらすべての供給源からのEpoRに結合しました。1G3を使用して、サンドイッチ酵素結合免疫測定法でsEpoRを評価し、可溶化された膜調製物中のEpoRはウエスタンブロッティングによって検出されました。EpoRを発現する細胞は免疫化学染色により同定されました。神経細胞株およびPC12細胞におけるEpoRの存在を確認し、EpoRは一次培養された海馬ニューロンで発現していました。