新しいsrcホモロジー3ドメインを持つプロリンリッチキナーゼSPRKの同定と特性評価

プロテインキナーゼは細胞の成長と分化において重要な役割を果たします。我々は、新しいプロテインキナーゼをコードするヒト巨核球細胞株CMK11-5からcDNAクローンを単離しました。これをSPRK（srcホモロジー3（SH3）ドメインを含むプロリンリッチキナーゼ）と呼びます。遺伝子配列は847アミノ酸のプロテインキナーゼを予測し、ユニークなドメイン配列を持っています。アミノ末端のグリシンリッチ領域の後にSH3ドメインとチロシンおよびセリン/スレオニンキナーゼに類似したキナーゼドメインがあります。キナーゼドメインの隣には、2つの密接に配置されたロイシン/イソロイシンジッパーモチーフと、核定位信号に似た基本アミノ酸の連続があります。SPRKのCOOH末端半分は塩基性であり、COOH末端の216アミノ酸中のプロリンは24%を占めます。sprk遺伝子は成人および胎児のヒト組織で4キロベースの転写産物として広く発現しています。エピトープタグ付きSPRKをコードするベクターで293細胞をトランスフェクションすると、95-kDaのタンパク質が発現します。エピトープタグ付きSPRKは、in vitroキナーゼアッセイにおいてセリンとスレオニン残基でリン酸化されますが、予測されたATP結合部位に点変異を有するSPRK変異体はリン酸化されません。これらのデータは、SPRKがセリン/スレオニンキナーゼ活性を持つことを示しています。SPRKのSH3ドメインは、SH3コンセンサス配列内の位置がニューロナルSRCおよびホスファチジルイノシトール3-キナーゼのp85サブユニットのSH3ドメインに見られる挿入と同じであるユニークな5アミノ酸の挿入によって中断されています。