哺乳類アデニル酸シクラーゼの可溶型の精製と特性評価

エンジニアリングされた哺乳類アデニル酸シクラーゼの可溶型が大腸菌に発現され、三つのクロマトグラフィー段階で精製されました。この酵素はATPの1分子を利用して、1分子のサイクリックAMPとピロリン酸を合成し、最大特異活性は12.8ミクモル/分/ミリグラムで、回転数は720分-1に相当します。膜貫通部位が存在しないにもかかわらず、酵素は哺乳類アデニル酸シクラーゼに共通するすべての調節特性を示します。Gsαおよびフォルスコリンによって相乗的に活性化され、アデノシン（P部位）アナログによって阻害され、その動的パターンは天然酵素と同一です。精製された酵素はGタンパク質ベータガンマサブユニット複合体によっても直接阻害されます。アデノウイルス媒介でアデニル酸シクラーゼ欠損HC-1細胞に発現後、酵素はGs結合型受容体とフォルスコリンによって相乗的に刺激されることができます。