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混合ルーメン微生物は、一日に二回(06:00および16:00)餌を与えられたルーメンフィスチュレーテッドのヘレフォード牛から得られました。飼料は70%のトウモロコシサイレージ、20%のアルファルファ干し草、9%の大豆ミール、微量ミネラル及びビタミン(13%粗蛋白質ダイエット)から成っていました。ルーメンの内容物は、朝の餌やりから4時間後にルーメンの底から収集され、四重のチーズクロスを通して絞り、酸素フリーのCO2でガス置換された分離フunnelに注がれ、39℃で最大60分間嫌気的にインキュベートされました。これにより、飼料粒子が浮遊します。表面に浮かんだ飼料粒子は真空管によって除去され、その後、小さな飼料粒子を除去するためにナイロン布(25 mmの孔径)を使用して液体部分が嫌気的にフィルタリングされました。フィルタリングされた液体部分は混合ルーメン微生物の供給源として使用されました。
Lee et al.(水曜日)はこの問題を研究しました。