HaloTag: 可溶性発現の向上とタンパク質機能分析への応用

技術的および方法論的進歩は、急速に進化するプロテオミクスの分野において重要です。融合タグシステムの開発は、再組換えタンパク質の精製と分析に不可欠です。HaloTagは、細菌のハロアルカン脱ハロゲナーゼに由来する34 KDaの単量体タンパク質です。今日使用されているほとんどの融合タグは、特定のリガンドとの可逆的結合相互作用を利用しています。HaloTagシステムは、クロロアルカンリガンドに対して共価的結合を形成するという点でユニークです。この結合により、HaloTagをさまざまな機能的レポータに付けることができ、再組換えタンパク質をラベル付けして固定化することができます。可溶性タンパク質のHaloTag発現成功率は非常に高く、マルトース結合タンパク質（MBP）タグと同等です。さらに、HaloTagの切断は、MBPタグでしばしば観察されるタンパク質の不溶解性を引き起こしません。本報告では、カスタムタンパク質マイクロアレイ上でのY. pestisタイプ3分泌システムのタンパク質間相互作用の継続的な調査におけるHaloTagシステムの応用について説明します。また、DNA結合活性とタンパク質特異性を特定するためにHalo Tagシステムの有用性を評価するために、親和性精製/質量分析（AP/MS）の利用についても説明します。