非同位体in situハイブリダイゼーションによる縞模様の中期染色体上の単コピー遺伝子の直接可視化

「ワンステップ」通常の光学顕微鏡を用いて、Gバンド染色体上の単コピー遺伝子の非同位体in situマッピングのための迅速な方法が説明されています。この方法は、ビオチニル化プローブを中期染色体にハイブリダイズさせることに基づいています。ビオチン残基はウサギ抗ビオチン抗体とペルオキシダーゼまたはコロイド金で標識された抗ウサギIgによって検出されます。ペルオキシダーゼ反応生成物またはコロイド金信号は銀の沈殿によって増幅されます。最終生成物は、紫のGバンド染色体上の遺伝子位における黒い銀の点です。N-rasおよびアルファ-1-アンチトリプシン遺伝子は、それぞれ1p13.1および14q31/32の挿入物を持つプラスミドを使用してマッピングされました。これらの実験における信号対雑音比は32:1から46:1の範囲でした。この技術は、少なくとも同位体in situハイブリダイゼーションと同じくらい感度が高く、ハイブリダイゼーションから1日以内に結果を得ることができ、より優れた解像度を持っています。さらに、遺伝子は反射コントラスト、蛍光、または位相顕微鏡のような特殊な技術なしで通常の光学顕微鏡によって可視化されます。この方法論は、より正確な染色体遺伝子の局在化を促進するはずです。