ビーズベースのヒトパピローマウイルスの multiplex ジェノタイピング

DNA ハイブリダイゼーション手法（逆ラインブロット（RLB）アッセイなど）によるヒトパピローマウイルス（HPV）のタイピングは、感度が高く、十分に検証されています。しかし、これらのアッセイを高スループット分析に適用することは限られています。ここでは、複数の高リスクおよび低リスクの性器 HPV ジェノタイプを単一反応中で同定するための定量的かつ感度の高い高スループット手法である multiplex ヒトパピローマウイルスジェノタイピング（MPG）の開発について述べます。MPG は、一般的なプライマー PCR（GP5+/6+）によって HPV DNA を増幅し、その後、蛍光標識されたポリスチレンビーズに結合した型特異的オリゴヌクレオチドプローブを用いて生成物を検出することに基づいています。MPG では最大 100 種類の異なる HPV タイプを同時に検出でき、この手法は迅速で労力を節約できます。私たちは、22 種類の HPV タイプを高い特異性と再現性（メディアンインタープレート変動係数が 10% 未満）で検出しました。異なる HPV タイプの検出限界は、PCR 生成物の 100 ～ 800 pg でした。MPG の性能を、94 の臨床サンプルから得られた GP5+/6+-PCR 生成物に基づく確立された RLB アッセイと比較しました。その評価は優れた一致を示しました（カッパ = 0.922）が、MPG の感度が高いことも示しました。結論として、MPG は大規模な疫学研究やワクチン試験、および日常的な診断目的に非常に適しているようです。