KSRPのヒトiNOS発現の転写後調節への関与－KSRPとTTPおよびHuRとの複雑な相互作用

私たちは、ヒト誘導型一酸化窒素(iNOS) mRNAの3'非翻訳領域(3'-UTR)と相互作用するタンパク質としてKH型スプライシング調節タンパク質(KSRP)を精製しました。KSRPの免疫除去はin vitro分解アッセイにおけるiNOS 3'-UTR RNAの安定性を高めました。KSRPを過剰発現させたDLD-1細胞において、サイトカイン誘導によるiNOS発現は著しく減少しました。これに応じて、KSRPの発現のダウンレギュレーションはiNOS mRNAを安定化させることでiNOS発現を増加させました。共免疫沈降により、KSRPとエクソソームおよびトリステトラプロリン(TTP)との相互作用が示されました。KSRPが3'-UTRに結合する役割を分析するため、KSRPの結合しない変異体を過剰発現するDLD-1細胞におけるiNOS発現を研究しました。これらの細胞では、iNOS発現が増加しました。結合部位のマッピングによって、KSRPがヒトiNOS mRNAの最も3'に位置しているAUリッチ要素(ARE)と相互作用していることが明らかになりました。この配列は、iNOS mRNAを安定化させるタンパク質HuRの標的でもあります。KSRPとHuRがこの結合部位を競合することを示すことができ、サイトカイン処理後にiNOS mRNAへの細胞内結合がKSRPでは減少しHuRでは増加することが分かりました。最後に、TTPおよびHuRとのKSRPの複雑な相互作用は、サイトカイン刺激後のiNOS mRNAの安定化に不可欠であるようです。