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최근 수십 년간, 생물촉매는 제약 제조에서 화학 촉매의 중요한 대안으로 떠올랐습니다. 생물촉매는 효소적 캐스케이드가 믿을 수 없는 선택성과 수율로 복합 분자를 합성할 수 있기 때문에 매력적입니다. 제약 생물촉매를 위한 효소는 일반적으로 정제되지 않은 상태로 사용되며, 기존의 크로마토그래픽 과정을 통해 효소를 대규모로 정제하는 것은 시간 소모적이고 비용이 많이 듭니다. 그러나 원료 효소 제제에 존재하는 불순물은 기질을 소모하고 원치 않는 부산물을 생성할 수 있으며, 원하는 제품의 분리를 더욱 번거롭게 만들 수 있습니다. 따라서 용이한 비크로마토그래픽 정제 방법은 제약 생물촉매에 큰 도움이 될 것입니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 효소를 비막이 없는 구획에 캡쳐하기 위해 비정상 단백질 영역인 LAF-1의 RGG 도메인과 융합했습니다. RGG 도메인은 액체-액체 상 분리를 겪을 수 있으며, 온도나 염 농도의 변화에 의해 유동 응축체를 형성합니다. 이러한 액체 응축체를 원심분리하여, 세포 용해물에 비해 상당히 향상된 순도를 가진 효소-RGG 융합체를 성공적으로 정제했습니다. 또한 우리는 정제된 융합 단백질을 이용하여 효소 활성을 측정하기 위한 효소 반응을 수행했습니다. 효소 분석 결과에 따르면, 원심분리 방법으로 정제된 효소-RGG 융합체는 효소 활성을 유지하며 원료 효소 제제에 비해 배경 활성이 크게 감소했습니다. 우리의 연구는 키나제, 인산화 효소, ATP 의존성 리가제 등 세 가지 서로 다른 효소에 초점을 맞추었습니다. 키나제와 인산화 효소는 몰누피라비르 생물촉매 캐스케이드의 구성 요소이며, 우리는 이 두 효소의 용이한 공동 정제를 실시했습니다. 결론적으로, RGG 태그를 통한 효소 캡쳐는 제약 합성을 위한 생물 분리 및 생물촉매의 어려움을 극복할 가능성을 약속합니다.
Li et al. (Mon,)는 이 질문을 연구했습니다.