Key points are not available for this paper at this time.
초록 최근 몇 년 동안, 보조 인자와 대사 산물에서 유래한 여러 비정형 RNA 캡이 확인되었습니다. 퓨린을 포함하는 RNA 캡은 광범위하게 연구되었으며, 여러 디캡 효소가 확인되었고, 니코틴아마이드 아데닌 다이뉴클레오타이드(NAD)-RNA에 대한 효율적인 캡처 및 시퀀싱 프로토콜이 개발되어 캡핑 기능을 단계적으로 설명할 수 있게 되었습니다. 풍부한 비정형 RNA 캡으로 확인된 UDP-당 캡 RNA는 복잡한 in vitro 준비로 인해 부분적으로 잘 이해되지 않고 있습니다. 여기에서는 쉽게 구할 수 있는 보호된 빌딩 블록에서 당 캡을 가진 유리딘-구아노신 이뉴클레오타이드를 확장 가능한 방식으로 합성하고, 이를 여러 세포벽 전구체 캡 이뉴클레오타이드로 효소적으로 전환하는 방법을 설명합니다. 우리는 T7 RNA 중합효소 촉매에 의해 in vitro 전사 반응에서 이러한 캡 이뉴클레오타이드를 사용하여 유리딘 이인산 N-아세틸글루코사민(UDP-GlcNAc), 그 N-아지도아세틸 유도체 UDP-GlcNAz 및 다양한 세포벽 전구체로 캡핑된 RNA를 효율적으로 생성했습니다. 추가로, 우리는 in vitro에서 UDP-GlcNAc-캡 RNA를 처리할 수 있는 네 가지 효소를 확인했습니다: 대장균의 MurA, MurB 및 MurC는 당 캡 구조를 순차적으로 수정할 수 있으며, 바이오 정합성의 클릭 가능한 부분을 도입하는 데 사용되었으며, 인간 Nudix 하이드롤라제 Nudt5는 효율적으로 UDP-GlcNAc-RNA의 디캡을 수행하는 것으로 나타났습니다. 우리의 발견은 캡 모델 RNA에 대한 효율적인 합성 방법의 중요성을 강조합니다. 또한, 우리는 UDP-GlcNAc 캡처 및 시퀀싱 프로토콜의 개발 및 적용에 유용하게 사용될 수 있는 효소 도구를 제공합니다. 이러한 프로토콜은 RNA의 광범위하면서도 불가사의한 GlcNAc 변형과 그 생리학적 중요성에 대한 이해를 심화하는 데 필수적입니다.
Weber 외 (수요일,) 이 질문을 연구했습니다.