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초록 포함체(IB)는 E. coli에서 재조합 단백질의 과발현 결과로 형성된 단백질 집합체입니다. 포함체의 형성은 추가적인 처리 단계, 즉 분리, 용해 및 재접힘이 필요함에도 불구하고 재조합 단백질 생산의 귀중한 전략입니다. 단백질 재접힘의 산업 공정 개발은 지식 기반 전략보다는 주로 경험적 접근에 의존하는 노동 집약적인 작업입니다. 지식 기반 공정 개발의 전제 조건은 신뢰할 수 있는 모니터링 전략입니다. 이 연구는 단백질 재접힘의 실시간 및 현장 모니터링을 위한 내재 트립토판 및 티로신 형광의 잠재력을 탐구합니다. 일반적으로 확립된 공정 분석 기술(PAT)과 대조적으로, 이 기법은 0.01 g L^-1까지 단백질 농도에 대한 재현 가능한 측정으로 높은 감도를 보였습니다. 재접힘 과정에서 단백질의 구조 변화는 트립토판 및 티로신 형광 스펙트럼의 최대치 위치 변화와 신호 강도의 변화로 반영됩니다. 평균 방출 파장으로 표현된 피크 위치의 변화는 접힘 중간체의 양과 상관관계가 있으며, 강도 적분은 집합의 정도와 상관관계가 있습니다. 이러한 상관관계는 기계적 모델에 대한 관찰 기능으로 구현되었습니다. 이 기술의 다양성과 전이 가능성은 구조적 복잡성이 다양한 세 가지 단백질의 재접힘에서 입증되었습니다. 이 기술은 또한 첨가제 및 공정 모드가 재접힘 공정 효율성에 미치는 영향을 감지하는 데 성공적으로 적용되었습니다. 따라서 제시된 방법론은 단백질 재접힘의 실시간 공정 모니터링을 가능하게 하는 일반적이고 신뢰할 수 있는 PAT 도구를 제공합니다. 그래픽 초록 단백질 재접힘에서 실시간 내재 형광 모니터링
Igwe 외. (목요일,) 이 질문을 연구했습니다.