À ce jour, des altérations de plus de 40 gènes régulant la mégacaryo(MK)poïèse ont été associées aux thrombocytopénies héréditaires (TH). Au cours de ma thèse, j'ai exploré les mécanismes responsables de deux formes de TH, CAMT et THC2, causées par des mutations affectant la principale voie de signalisation régulant la MKpoïèse, l'axe thrombopoïétine (TPO)/MPL. Des mutations dans le gène codant pour le récepteur de la TPO, MPL, sont responsables de la CAMT, une thrombocytopénie sévère à transmission autosomique récessive qui progresse rapidement vers une insuffisance médullaire. Un nouveau variant MPLR464G a été récemment découvert chez les enfants d'une famille consanguine. En utilisant les lignées cellulaires dans lesquels j'ai introduit la mutation d'intérêt, j'ai pu déterminer que MPLR464G génère un récepteur immature qui est retenu dans le RE et est faiblement exprimé à la surface cellulaire, avec un impact sur la signalisation et la prolifération médiée par la TPO, ou son mimétique Eltrombopag (ELT), ou les deux combinés. La surexpression d'un mutant CALR trouvé dans les NMP n'a pas restauré l'expression de surface du récepteur ni la signalisation, alors qu'en la combinant avec ELT la signalisation et la prolifération ont été corrigées. De plus, la surexpression de CALRmut et l'ELT ont permis de restaurer complètement la maturation MK d'un patient CAMT in vitro suggérant que la présence de CALRmut favorise l'activation de MPLR464G par ELT, mais pas par TPO. La THC2 est causée par des mutations dans la région 5'UTR du gène ANKRD26; les patients présentent une thrombocytopénie et un risque augmenté de développer une leucémie myéloïde. Des études antérieures du laboratoire ont montré que RUNX1 et FLI1 inhibent l'expression d'ANKRD26 lors de la MKpoïèse normale, et que les mutations trouvées chez les patients empêchent leur fixation conduisant à une expression persistante d'ANKRD26. Cela conduit à une activation accrue de la voie MAPK liée au défaut de formation des proplaquettes. ANKRD26 serait donc nécessaire lors des premières étapes de la MKpoïèse, mais son expression doit être diminuée à la fin de maturation. Au cours de ma thèse, j'ai participé au travail montrant que la surexpression d'ANKRD26 empêche l'internalisation de MPL entraînant une activation plus forte des voies JAK/STAT, PI3K et MAPK, une prolifération et une hypersensibilité accrues à la TPO et à son analogue, l'ELT. Puisque certains patients présentent la leucocytose ou erythrocytose, et que EPOR et G-CSFR appartiennent à la même famille de récepteurs de cytokines que MPL, avec des caractéristiques structurelles communes, nous avons supposé que ANKRD26 peut interagir avec ces récepteurs et moduler leur activité. En utilisant des lignées cellulaires, nous avons confirmé que ANKRD26 interagit avec ces trois récepteurs et montré que l'expression soutenue d'ANKRD26 conduit à une signalisation accrue également en réponse aux EPO et G-CSF. En utilisant des cellules primaires, nous avons confirmé que la modulation d'ANKRD26 affecte la prolifération et la maturation des lignages granulocytaire et érythroïde. Ces travaux ont établi un rôle crucial d'ANKRD26 en tant que nouveau modulateur de la signalisation médiée par les cytokines dans l'hématopoïèse. En effet, dans l'hématopoïèse normale, ANKRD26 est fortement exprimée lors des étapes précoces de la différenciation érythroïde, MK et granulocytaire pour préserver une forte signalisation cytokine/récepteur de type I qui mettra l'amplification du lignage, puis est progressivement diminuée, afin de réduire la signalisation et permettre une maturation correcte. Par conséquent, les niveaux d'expression anormaux d'ANKRD26 détectés chez les patients THC2 augmentent la signalisation médiée par les 3 récepteurs homodimériques de type I MPL, G-CSFR et EPOR, et impactent la prolifération/différenciation de ces trois lignées myéloïdes conduisant donc à une thrombocytopénie, une érythrocytose et prédisposition à la leucémie.
Francesca Basso-Valentina (Wed,) studied this question.