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개별 단백질에 화학 프로브를 특이적으로 부착하는 능력은 살아있는 세포에서 단백질 기능의 연구 및 조작을 위한 강력한 접근법을 나타냅니다. 이는 다양한 실험 설정에서 융합 단백질 이미징에 대해 간단하고 강력하며 다재다능한 접근법을 제공합니다. 그러나 화학 프로브를 사용한 탐지의 잠재적 단점은 반응하지 않거나 비특이적으로 결합된 프로브로 인한 형광 배경입니다. 이 보고서에서는 살아있는 세포에서 SNAP-태그 융합 단백질을 표지하는 데 사용되는 새로운 형광 프로브의 설계 및 응용을 제시합니다. SNAP-태그는 벤질구아닌 유도체와 공유 결합 반응을 하는 인간 복구 단백질 O(6)-알킬구아닌-DNA 알킬전이효소(hAGT)의 공학적 변형입니다. 벤질 잔기에 부착된 리포터 그룹은 SNAP 태그에 공유 결합으로 부착되며, 구아닌은 이탈 그룹으로 작용합니다. 구아닌 그룹에 퀜처를 포함시키면 벤질구아닌 프로브가 SNAP-태그 단백질의 라벨링 시에만 높은 형광을 나타냅니다. 우리는 SNAP-태그에 융합된 세포 표면 위치의 에피더말 성장 인자 수용체(EGFR)의 세척 없는 라벨링 및 세포 용해물에서 SNAP-태그된 β-튜불린의 직접 정량화를 위해 분자 내에서 퀜칭된 프로브를 사용하는 방법을 설명합니다. 또한, 우리는 벤질구아닌 기질에 대한 반응성이 최대 10배 증가하는 SNAP-태그의 빠른 라벨링 변종인 SNAP(f)을 특성화했습니다. 제시된 데이터는 SNAP(f)와 형광 기질의 조합이 라벨링 및 이미징 응용을 위한 배경 형광을 크게 감소시킨다는 것을 보여줍니다. 이 접근법은 살아있는 세포에서 단백질 동역학의 고감도 시공간 조사를 가능하게 합니다.
Sun et al. (화,)은 이 문제를 연구했습니다.
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