사이트 지향 RNA 편집을 통한 낭포성 섬유증 막 관통 도관 조절자 내 돌연변이 교정

RNA에 작용하는 아데노신 탈아민화 효소는 사이트 지향 변이 유발 과정의 자연적인 과정을 촉진하는 보존된 효소 패밀리입니다. 생화학적으로 이들은 아데노신을 이노신으로 전환하는데, 이노신은 번역 중 구아노신으로 읽힙니다. 따라서 mRNA에서 편집이 발생하면 코돈이 재코딩되고 변화는 단백질 기능을 변경할 수 있습니다. RNA 2에 작용하는 인간 아데노신 탈아민화 효소에서 내재적 표적 도메인을 제거하고 이를 안티센스 RNA 올리고뉴클레오타이드로 대체함으로써, 우리는 RNA 레지스터 전역을 편집할 수 있는 재조합 효소를 설계했습니다. 여기서 우리는 이 효소가 단일 아데노신을 효율적이고 선택적으로 편집할 수 있음을 보여줍니다. 원리의 증명으로서, 우리는 낭포성 섬유증 막 관통 도관 조절자 음이온 채널을 암호화하는 mRNA에서 조기 종결 코돈을 교정합니다. 제논푸스 난균에서 우리는 우리의 편집효소의 유전적으로 인코딩된 버전이 낭포성 섬유증 막 관통 도관 조절자 mRNA를 교정하고, 전체 길이의 단백질을 복원하며, 플라스마막을 가로지르는 기능적인 클로라이드 전류를 재establish할 수 있음을 보여줍니다. 마지막으로, 인간 세포주에서 우리는 우리의 편집효소와 가이드 RNA의 유전적으로 인코딩된 버전이 조기 종결 코돈을 포함한 비기능성 향상된 녹색 형광 단백질 버전을 교정할 수 있음을 보여줍니다. 이 기술은 다양한 유전적 돌연변이를 교정하고 표적 뉴클레오타이드 탈아민화를 통해 단백질 기능을 미세 조정하는 강력한 접근 방식을 선도할 것입니다.