세포내 흐름 세포분석 염색 프로토콜 v2

활성화된 세포 집단은 생체 내 자극된 조직이나 생체 외 자극된 배양세포(예: 항원 특이적 활성화 또는 미토겐 유도)에서 준비될 수 있습니다. 사이토카인 및 케모카인 검출을 위해서는 세포 배양 활성화의 마지막 4-6시간 동안 브레펠딘 A (BioLegend Cat. No. 420601) 또는 모네신 (BioLegend Cat. No. 420701)과 같은 단백질 수송 억제제를 포함하는 것이 중요합니다. 세포는 면역형광 염색을 위해 12 x 75 mm 플라스틱 튜브나 마이크로웰 플레이트에 분산될 수 있습니다. 자극 방법에 대한 자세한 내용은 사이토카인/케모카인 자극 가이드를 참조하시기 바랍니다: (www.biolegend.com/mediaₐssets/supportₚrotocol/BioLegendStimulationGuide₁01711.pdf) 2. 서로 다른 사이토카인/케모카인은 서로 다른 생산 정점을 가집니다. 최적의 염색 신호를 얻기 위해 각 자극제의 자극 조건을 최적화해야 합니다. 3. 원주 세포 표면 마커를 인식하는 일부 항체는 고정된/변성된 항원에 결합하지 않을 수 있습니다. 이러한 이유로 세포 표면 항원의 염색은 고정/투과화 이전에 생존한 비고정 세포로 수행하는 것이 권장됩니다. 세포 표면 항원의 염색 전에 세포를 고정하는 절차로 변경하는 경우, 파라포름알데히드-변성 항원 반응 항체 클론을 경험적으로 확인해야 합니다. 또한, 4% PFA로 고정 후 에피토프가 어떻게 염색되는지에 대한 아이디어를 얻으려면 저희 고정 웹페이지 (www.biolegend.com/fixation)를 방문해 보십시오. 고정 후 염색 능력은 형광 물질, 항원 발현 및 몇 가지 다른 요인에 따라 달라짐을 유의하시기 바랍니다.