기존 매핑 개체군의 DNA 풀을 사용하여 특정 염색체 구간에서 분자 마커를 분리하는 방법

우리는 기존 매핑 개체군을 사용하여 염색체의 특정 영역에 대한 분자 마커를 분리하는 일반적인 방법을 제시합니다. 두 개의 상반형 대립유전자에 대해 동형접합인 개인으로부터 DNA 풀을 구성하며, 이는 두 개 이상의 연결된 RFLP 마커로 정의된 목표 염색체 구간에서 생성됩니다. 이 DNA 풀은 이후 난수 올리고뉴클레오타이드 프라이머와 PCR을 사용하여 다형성을 검사합니다 (1). 다형성 DNA 밴드는 선택된 구간 내 또는 인접한 DNA 서열을 나타내야 합니다. 우리는 줄기 절단(조인트리스) 및 과일 성숙(비숙성)을 조절하는 유전자를 포함하는 두 개의 유전체 구간을 사용하여 이 방법을 토마토에서 테스트했습니다. 각 구간에 대해 7에서 14명의 F2 개인을 포함하는 DNA 풀이 200개의 무작위 프라이머로 스크리닝되었습니다. 이에 따라 세 개의 다형성 마커가 확인되었고, 이 중 두 개는 선택된 구간과 밀접하게 연결되어 있는 것으로 나타났습니다. 세 번째 마커는 동일한 염색체(11)에 매핑되었지만 선택된 구간에서 45 cM 떨어져 있었습니다. 이 방법의 특히 매력적인 속성은 단일 매핑 개체군을 사용하여 게놈의 어떤 구간이든 목표로 삼을 수 있다는 것입니다. 이 방법은 토마토에서 입증되었지만, 유전자 연관 맵을 구성하는 분리 개체군이 사용되는 모든 성적으로 번식하는 유기체에도 적용 가능해야 합니다.