무작위 분열 및 재조합에 의한 DNA 셔플링: 분자 진화를 위한 인 비트로 재조합.

선형 서열의 진화에 대한 컴퓨터 시뮬레이션은 점 돌연변이 단독보다는 서열의 블록 재조합의 중요성을 입증하였습니다. 점 돌연변이, 재조합 및 선택의 반복 사이클을 통해 단백질과 같은 복합 서열의 인 비트로 분자 진화를 가능하게 할 수 있습니다. 무작위 DNA 조각에서 유전자의 재조합을 위한 방법이 보고되었습니다. DNase I 소화 및 10-50 bp의 무작위 조각 순화 후 1-kb 유전자는 원래의 크기와 기능으로 재조립되었습니다. 유사하게, 2.7-kb 플라스미드도 효율적으로 재조립될 수 있었습니다. 75 bp 떨어진 두 마커 간의 완전한 재조합이 이루어졌습니다; 각 마커는 별개의 유전자에 위치해 있었습니다. 유전자와 상동성을 가진 3' 및 5' 말단을 가진 올리고뉴클레오타이드를 조각 혼합물에 추가하여 재조립된 유전자에 통합할 수 있습니다. 따라서 합성 올리고뉴클레오타이드와 PCR 조각의 혼합물이 상동성을 기반으로 한 정의된 위치에서 유전자에 혼합될 수 있습니다. 예를 들어, 인터루킨 1 베타에 대한 인간과 설치류 유전자의 키메라 라이브러리가 준비되었습니다. 셔플링은 부모 DNA와의 역교배와 같은 일부 표준 유전적 조작의 인 비트로 동등물로도 사용할 수 있습니다. 재조합의 이점은 분자 진화의 사이클 수가 증가함에 따라 기존 돌연변이 방법에 비해 더욱 증가할 가능성이 있습니다.