셀프 어소시에이팅 분할 GFP를 이용한 막 융합 모니터링을 위한 이중 기능성 분할 리포터 단백질 생성

자기 결합 및 재활성화가 가능한 분할 리포터 단백질은 생의학 연구에 응용될 수 있지만, 이러한 단백질을 설계하는 것은 특히 적절한 분할 지점 선택이 다소 임의적입니다. 우리는 셀프 어소시에이팅 모듈로서 분할 GFP를 사용하여 분할 단백질 생성을 촉진하는 새로운 방법론을 설명합니다. 우리는 먼저 관심 단백질의 여러 후보 분할 지점 중 하나에 전체 GFP 모듈을 삽입하고, 원래 단백질에 비해 GFP 신호와 높은 활성을 유지하는 클론을 선택했습니다. 이러한 키메라 클론이 확인된 후, GFP 도메인 내에서 GFP가 삽입된 키메라를 분할하여 최종적인 두 개의 분할 단백질 쌍을 생성했습니다. Renilla reniformis 루시페라제를 대상으로 이 전략을 적용하여, 이전의 분할 지점보다 10배 더 높은 활성을 제공하는 새로운 분할 지점을 확인했습니다. 새로운 쌍의 분할 리포터 단백질을 사용하여 막 융합 과정을 높은 감도로 모니터링했습니다. 또한, HaloTag 단백질과 반딧불이 루시페라제에 대한 새로운 분할 지점을 성공적으로 확인하여, GFP와 원래 단백질의 기능을 회복하는 자기 결합 분할 단백질 쌍을 생성했습니다. 이러한 간단한 스크리닝 방법은 분할 GFP 도메인을 통해 자기 결합이 가능한 분할 단백질 설계를 촉진할 것입니다.