곤충 세포에서 인간 다제내성 cDNA의 발현은 약물로 자극된 고활성 막 ATPase를 생성합니다.

약물 내성 종양 세포는 다제내성(MDR1) 유전자 산물인 세포막 P-글리코프로테인의 작용에 의해 다양한 항암제를 적극적으로 배출합니다. 본 보고서에서는 배큘로바이러스 벡터를 통해 배양된 Sf9 곤충 세포에서 인간 MDR1 유전자의 발현이 고활성 바나데이트 민감성 막 ATPase를 생성함을 보여줍니다. 이 ATPase는 빈블라스틴 및 베라파밀과 같이 P-글리코프로테인과 상호작용하는 것으로 알려진 약물에 의해 뚜렷하게 자극되며, 다양한 약물이 ATPase를 자극하는 능력은 이 수송체에 대한 이전에 관찰된 친화도에 해당합니다. 약물로 자극된 ATPase는 감염되지 않은 또는 모조 감염된 Sf9 세포에서는 존재하지 않으며, 그 출현은 단클론 항-MDR 단백질 항체와 8-아지드-ATP로 라벨링하여 검출된 MDR1 유전자 산물의 출현과 상관관계가 있습니다. 약물에 의해 유도된 ATPase는 마그네슘 이온을 필요로 하며, 기질로 ADP나 AMP를 사용하지 않으며, 약 0.5 mM MgATP에서 반 최대 활성화를 보이고, 최대 활성도(약 3-5 μmol/mg MDR 단백질/분)는 잘 특징화된 이온 수송 ATPase의 활성에 접근합니다. 이러한 결과는 인간 다제내성 단백질의 고용량 약물 자극 ATPase 활성을 직접적으로 최초로 입증하고, 다양한 약물이 이 임상적으로 중요한 효소와의 기능적 상호작용을 조사하기 위한 새로운 간단한 분석법을 제공합니다.