쥐 비장 세포질에서 O-GlcNAc 선택적 N-아세틸-베타-D-글루코사미니다제를 정제하고 특성화하다.

핵 및 세포질 단백질의 O-연결 N-아세틸글루코사민 (O-GlcNAc) 단당류에 의한 당화는 풍부하고 보편적이며 일시적인 번역후 수정입니다. 이러한 사탕을 제거하는 효소를 특성화하기 위해 O-GlcNAc-합성 글리코펩타이드에 대해 강한 선택성을 가진 중성 및 세포질 N-아세틸-베타-D-글루코사미니다제(O-GlcNAcase)를 쥐 비장 균질액에서 22,000배 이상 정제하였습니다. 정제된 O-GlcNAcase는 명백한 M(r) = 54,000 (알파 소단위) 및 M(r) = 51,000 (베타 소단위)의 두 개 주요 폴리펩타이드를 가지고 있습니다. 효소 활성은 자당 기울기에서 M(r) = 106,000에서 침강하며, 이는 자연 O-GlcNAcase가 알파 베타 이질 이량체임을 나타냅니다. O-GlcNAcase는 또한 다른 헥소사미니다제보다 O-GlcNAc-합성 글리코펩타이드에 대해 상대적으로 훨씬 강한 활성을 보입니다. 산성 리소좀 헥소사미니다제와 달리 O-GlcNAcase는 GalNAc 또는 그 유사체에 의해 억제되지 않으며, 다른 검출 가능한 글리코시다제 활성이 없고, 산성 헥소사미니다제에 대한 항체와 교차 반응하지 않습니다. 세포소기관 분획 및 잠복 연구는 효소의 세포질 및 핵질 위치와 조직 내에서의 보편적인 존재를 보여줍니다. 이러한 연구 결과는 O-GlcNAcase가 세포의 핵질 및 세포질 구획에서 O-GlcNAc가 포함된 글리코단백질로부터 O-GlcNAc의 조절된 제거에 관여하고 있음을 시사합니다.