NF-kappa B의 P50 서브유닛에 의한 DNA 인식에서 시스테인이자 62의 역할

NF-kappa B의 p50 서브유닛에 의한 DNA 인식의 결정 인자를 정의하기 위해 강력한 화학 수정 절차가 개발되었습니다. 14C 아이오도아세테이트를 이용한 차등 표지법을 통해 단백질의 특정 인식 부위를 포함하는 올리고뉴클레오타이드의 존재에 의해 수정으로부터 보호되는 보존된 시스테인 잔기인 Cys62가 확인되었습니다. 이 시스테인 잔기의 중요성을 결정하기 위해, p50의 보존된 시스테인을 각각 세린으로 변경하고, 돌연변이 단백질의 DNA 결합 특성을 측정했습니다. 스캐차드 분석 결과 C62S 돌연변이는 야생형 단백질보다 10배 더 큰 해리 상수를 가지고 DNA 인식 부위에 결합하는 것으로 나타났으며, 다른 두 개의 돌연변이는 중간 친화도로 결합했습니다. 해리 속도 상수 측정값은 야생형, C119S 및 C273S p50 단백질의 해리 상수와 잘 일치했으며, p50 C62S-DNA 복합체는 비정상적으로 빠르게 해리되었습니다. DNA 인식 부위의 올리고뉴클레오타이드 변종과 비특이적 E. coli DNA와의 경쟁 분석 결과, C62S p50 돌연변이가 수정된 DNA 결합 부위의 특이성을 가지며 특정 DNA와 비특이적 DNA를 구별하는 능력이 저해된 것으로 나타났습니다. 따라서 Cys62의 유황기가 NF-kappa B의 p50 서브유닛에 의한 DNA 인식의 중요한 결정 인자입니다.