아데노 관련 바이러스 일반 전이 벡터: 프로바이러스 구조 분석

우리는 두 종류의 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터를 사용하여 인간 세포에 네오마이신 저항 유전자를 전이시켰습니다. 첫 번째 벡터(dl52-91)는 AAV 복제 유전자를 유지하고, 두 번째 벡터(dl3-94)는 AAV 말단 반복과 AAV 폴리 아데닐화 신호(428 염기 쌍)만을 유지합니다. 두 벡터 모두 AAV 바이리온으로 패키징할 수 있었고 본질적으로 동일한 프로바이러스 구조를 생성했습니다. 따라서 바이러스 DNA의 패키징(pac), 통합(int), 구출(res), 복제(ori)에 필요할 AAV 서열은 말단 반복을 포함하는 284 염기 쌍 시퀀스 내에 위치해 있습니다. G418r 세포주 대부분(73%)은 적절한 헬퍼 바이러스에 의해 세포가 초감염될 경우 구출될 수 있는 프로바이러스를 포함하고 있었습니다(Res+). 일부는 높은 수량의 바이러스 DNA를 생성했고; 다른 경우는 50배 낮은 수준에서 구출되었습니다. Res+(79%)인 대부분의 세포주는 AAV 게놈의 단일 반복체(2~20 복제본)를 포함하고 있었으며, 이는 세포 DNA에 대해 무작위로 통합되었습니다. 단일 배열의 두 연속 AAV 복제본 사이의 접합부는 AAV 말단 회문을 하나 또는 두 개 포함하고 있었습니다. AAV와 세포 서열 간의 접합부는 주로 AAV 말단 반복에서 또는 그 안에서 발생했으나, 경우에 따라 내부 AAV 서열에서 발생했습니다. 두 가지 세포주에서는 AAV DNA의 자유 에피소말 복제본이 관찰되었습니다. Res+ 클론은 삭제된 프로바이러스 또는 삭제된 게놈의 단일 반복체를 포함했습니다. 때때로, 인접한 세포 DNA도 증폭되었습니다. AAV DNA 통합의 초감염 억제는 없었습니다. 우리의 결과는 AAV 서열이 통합 전이나 후에 DNA 복제를 통해 증폭되며, 복제 메커니즘이 AAV 용해 감염 중에 사용되는 것과 다르다는 것을 시사합니다. 또한 외래 DNA의 삽입을 위한 최대 공간을 제공하고 높은 빈도로 통합되는 새로운 AAV 일반 전이 벡터(dl3-94)를 설명했습니다.