MspI 개조 효소의 클로닝. 개조 지점 및 MspI와 HpaII에 의한 절단 효과.

Moraxella에서 MspI 개조 효소의 유전자가 플라스미드 벡터 pBR322를 사용하여 대장균에서 클로닝 되었다. 효소를 인코딩하는 수정된 플라스미드를 절단하는 저항성에 기반하여 유전자를 가진 형질전환체를 선택하였다. 선택된 클론에서는 염색체 DNA와 플라스미드 DNA가 모두 수정되었다. 얻어진 클론 중 그 어떤 것도 동종 제한 효소를 생산하지 않았으며, 이는 이 시스템에서 제한 효소와 메틸화효소의 유전자가 밀접하게 연결되어 있지 않음을 시사한다. 재조합 균주에서 준비된 조잡한 세포 추출물에는 호스트인 E. coli HB101이 아닌 MspI 인식 부위인 CCGG에 특이적인 S-아데노실메티오닌 의존성 메틸트랜스퍼레이스가 포함되어 있다. 효소의 생산은 원래 Moraxella 균주보다 형질전환체에서 3-4배 더 많다. 반응의 생성물로 5-메틸사이토신이 크로마토그래피적으로 확인되었다. 인식 서열 *CCGG의 외부 사이토신이 DNA 시퀀싱 방법에 의해 메틸화 지점으로 나타났다. 이 수정은 MspI와 그 이소클론인 HpaII에 의한 절단을 차단한다. HpaII는 비메틸화된 반쪽 메틸화 기질의 가닥을 절단할 수 있지만 MspI는 할 수 없다. 이 결과들이 MspI와 HpaII를 사용하여 게놈 DNA의 메틸화 패턴을 분석하는 것과 관련하여 논의된다.