인간 유전자 요소에서 비대칭적 복제는 아데노-연관 바이러스 Rep 단백질에 의존한다

인간 파르보바이러스 아데노-연관 바이러스 유형 2(AAV)의 DNA는 인간 염색체 19의 정의된 지역에 선호적으로 통합된다. 잠재적으로 감염된 세포주에서의 게놈 DNA의 서던 블롯 분석은 프로바이러스가 단순히 세포 DNA에 삽입된 것이 아님을 드러냈다. 프로바이러스와 인접한 세포 DNA의 조직 구조는 제한된 DNA 복제와 재배치를 포함하는 복잡하고 조정된 과정에 의해 통합이 이루어졌음을 나타냈다. 그러나 표적 통합의 메커니즘은 여전히 불분명하다. AAV의 두 개의 더 큰 비구조 단백질(Rep68과 Rep78)은 통합 자리(P1)와 AAV 역전단말 반복에 모두 존재하는 서열 요소에 결합한다. 이러한 결합은 표적 통합에 중요할 수 있다. 표적 통합의 메커니즘을 조사하기 위해, 우리는 재조합 Rep 단백질의 존재 또는 부재 하에 세포에서 분리한 복제 시험에서 클론된 통합 자리 하위 조각을 테스트했다. 선형 또는 열린 원형 템플릿 DNA의 광범위하고 비대칭적인 복제는 P1 서열 및 Rep 단백질의 존재에 의존했다. 클론된 P1 요소에 대한 Rep의 활성은 AAV 역전단말 반복에 대한 활성과 유사하다. 복제는 Rep의 서열 특이적 절단 활성에 의해 생성된 3'-OH에서 시작되는 것으로 보인다. 이는 Rep와 절단의 5'-티미딘 간의 공유 결합을 초래한다. 프로바이러스 구조의 복잡성은 통합 중 Rep에 의해 촉진된 제한된 DNA 복제의 참여로 설명될 수 있다.