에피토프 추가 방법을 사용하여 Saccharomyces cerevisiae에서 RAS 반응성 아데닐릴 사이클라아제 복합체 정제.

우리는 작은 펩타이드 에피토프와의 융합을 기반으로 Saccharomyces cerevisiae 아데닐릴 사이클라아제의 면역 친화적 정제 방법을 개발했습니다. 펩타이드 에피토프를 인코딩하는 올리고뉴클레오타이드 기술을 사용하여 S. cerevisiae 알코올 탈수소효소 프로모터 ADH1에서 융합 단백질을 발현하는 플라스미드를 구축했습니다. 펩타이드에 대해 이전에 생성된 단클론 항체를 사용하여 친화 크로마토그래피로 아데닐릴 사이클라아제를 정제했습니다. 정제된 효소는 200킬로달톤 아데닐릴 사이클라아제 융합 단백질과 식별되지 않은 70킬로달톤 단백질로 구성된 다분자 복합체로 보였습니다. 정제된 단백질은 RAS 단백질에 의해 활성화될 수 있었습니다. 활성화는 구아닌 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 절대적인 요구 사항이 있었습니다.