Key points are not available for this paper at this time.
단일 분자 국소화 현미경(SMLM) 기술은 10nm 이하의 공간 해상도로 서브 회절 이미징을 가능하게 합니다. SMLM의 다양한 변형에 대해 많은 논의가 있었으며, 이제는 모든 기능을 갖춘 현미경을 구매할 수 있어 자체 소프트웨어나 하드웨어 개발이 필요하지 않습니다. 그러나 생성된 이미지의 신뢰성과 품질, 그리고 간과된 준비 아티팩트의 가능성에 대한 논의는 거의 없었습니다. 공간 해상도의 두 배 향상으로 인해 더 많은 세부 사항이 관찰되며, 이는 샘플을 고정하고, 투과성을 부여하며, 염색하는 데 필요한 여러 단계로 인한 분포 및 초구조의 변화를 포함합니다. 여기에서는 다양한 고정제, 고정제 농도, 투과성 농도 및 타이밍, 항체 농도, 완충액을 포함한 이러한 단계들을 체계적으로 조사합니다. 우리는 포유류 세포주에서 미세소관, 미토콘드리아 및 액틴을 염색하기 위한 세 가지 최적화된 고정 프로토콜을 제시하고, 그런 다음 이 프로토콜을 사용하여 준비된 샘플에서 얻은 이미지와 관련된 다양한 아티팩트에 대해 논의합니다. SMLM 이미지에서 이러한 오류가 발견되지 않을 가능성과, 공초점 현미경에 적용된 이전의 매개변수를 사용하여 '좋은' 이미지를 정의하는 데 발견되는 복잡성에 대해서도 논의합니다.
Whelan et al. (Wed,)는 이 질문을 연구했습니다.