인간 A431 표피암 세포 및 피부 섬유아세포에서의 표피 성장 인자 수용체의 합성, 전환 및 하향 조절.

인간 피부 섬유아세포 및 A431 표피암 세포에서 Triton X-100으로 추출한 표피 성장 인자(EGF) 수용체는 폴리에틸렌 글리콜로 침전 가능한 EGF 결합 활성을 신속하게 잃는다. 수용체를 교차 링크하고 응집시킬 수 있는 concanavalin A의 존재는 잃어버린 EGF 결합 활성을 정량적으로 회복할 수 있게 했다. Triton X-100으로 용해된 수용체의 EGF 결합에 대한 Scatchard 분석은 A431 세포와 피부 섬유아세포가 각각 약 1.5 × 10^6 및 7 × 10^4 EGF 결합 부위를 세포당 가지며, 리간드에 대한 친화성이 유사함을 보여주었다. 두 세포 유형 간의 수용체 수의 큰 차이를 설명하기 위해 수용체 합성 속도 또는 분해 속도의 차이가 있는지를 확인하기 위해 중량 동위 원소 밀도 이동 방법이 사용되었다. 세포를 중량(15N, 13C, 2H) 아미노산이 포함된 배지로 옮긴 후, 총 세포막에서 용해된 경량 및 중량 수용체는 밀도 경사에서 등밀도 분리되었고 정량화되었다. A431 세포가 피부 섬유아세포보다 12배 더 빠른 속도로 EGF 수용체를 합성하고 A431 세포의 수용체 분해 반감기가 피부 섬유아세포(t1/2 = 9 h)보다 다소 긴(t1/2 = 16 h) 것으로 보여졌다. A431 세포에서 세포 표면 및 총 세포 EGF 결합 용량의 하향 조절은 t1/2가 2-3시간이고 12시간 내에 수용체 수준이 70-83% 감소함을 초래한다. Scatchard 분석은 EGF 결합의 이러한 변화가 수용체 수의 변화에 기인하며 EGF 결합 친화성의 변화가 아님을 보여주었다. EGF 수용체 합성 및 비활성화/분해 속도는 중량 동위 원소 밀도 이동 방법으로 결정되었다. EGF 수용체의 하향 조절 결과로 수용체 합성 속도는 변화가 없었다. 그러나 하향 조절은 수용체 반감기를 16시간에서 4.5시간으로 감소시켰다. 이러한 결과는 A431 세포에서 EGF 의존적 EGF 수용체 수준의 조절이 수용체 비활성화 속도의 변화를 포함함을 나타낸다.