인간 케라틴 18의 주요 생리학적 인산화 사이트의 확인: 잠재적인 키나제 및 필라멘트 재구성에서의 역할.

케라틴을 포함한 중간 필라멘트의 인산화가 필라멘트 재구성에 중요한 역할을 한다는 점에서 많은 인 vitro 증거가 있습니다. 중간 필라멘트 인산화의 기능을 더 잘 이해하기 위해, 우리는 인간 케라틴 폴리펩타이드 18(K18)의 주요 인산화 사이트를 확인하고 필라멘트 조립 또는 재구성에서의 역할을 연구하고자 했습니다. 우리는 잠재적인 인산화 사이트에서 K18 세린을 알라닌으로 변환하는 일련의 변이를 생성한 후, 곤충 세포에서 발현시키고 생성된 구조물의 트립신 32PO4-표지 패턴을 비교했습니다. 이 접근 방식을 사용하여, 32PO4-표지된 트립신 펩타이드의 에드만 분해와 정상 인간 대장 조직에서 라벨링 후 분석된 트립신 펩타이드와의 비교를 병행하여, 세린-52가 주요 K18 생리학적 인산화 사이트로 확인되었습니다. K18의 세린-52는 당화되지 않으며, CAM 키나제, S6 키나제 및 단백질 키나제 C에 의한 인산화를 위한 합의 서열과 일치하며, 이 모든 키나제는 주로 해당 사이트에서 K18을 in vitro로 인산화할 수 있습니다. 포유류 세포에서 K18 세린-52-->알라닌 돌연변이를 발현한 결과는 최소한의 인산화를 보였지만, 야생형 K18과 비교했을 때 필라멘트 조립에서 구분 가능한 차이는 없었습니다. 반대로, 세린-52 돌연변이는 오카다산으로 처리된 세포 또는 세포 주기의 G2/M 단계에서 정지된 세포의 필라멘트 변화 분석에 기반하여 필라멘트 재구성에서 명확하지만 비독점적인 역할을 했습니다. 우리의 결과는 세린-52가 인터페이스 세포에서 인간 K18의 주요 생리학적 인산화 사이트임을 나타내며, 그 인산화가 필라멘트 재구성에서 in vivo 역할을 할 수 있음을 보여줍니다.