담배에서 유도체로 생기는 세스퀴터펜 사이클라제의 유전자 군.

유도체 처리된 담배 조직에서 이소프레노이드 중간체인 파르네실 이인산을 세스퀴터페노이드 식물 항균물질인 캡시디올로 변환하는 초기 단계는 유도 가능한 세스퀴터펜 사이클라제인 5-에피-아리스톨로켄 합성 효소(EAS)의 촉매 작용에 의해 이루어진다. EAS를 암호화하는 두 개의 독립적인 cDNA 클론(cEAS1 및 cEAS2)가 차별적 하이브리다이제이션을 통해 유도체 유도 담배 cDNA 라이브러리에서 분리되었고, 그 후 하이브리드 선택 및 생체 외 번역으로 특성화되었다. 175 C 말단 아미노산을 암호화하는 부분 cDNA 클론 cEAS1을 대장균 발현 벡터에 삽입한 결과, EAS 특이 다가 항체로 면역 감지 가능한 융합 단백질의 축적이 이루어졌다. cDNA 클론을 사용하여 15-kb 게놈 클론에서 5킬로베이스(kb) 떨어진 두 개의 전체 길이 EAS 유전자를 분리하였다. 구조 유전자 구성 요소의 뉴클레오타이드 서열은 전사 시작 위치에서 388 염기 쌍(bp)에서부터 번역 종결 코돈 아래로 40 bp까지 동일하여 상대적으로 최근의 복제 사건을 암시한다. 이 유전자들은 각각 1479-bp 오픈 리딩 프레임을 갖고 있으며, 각 유전자에는 5개의 인트론이 포함되어 있고 56,828-Da 단백질을 지정한다. 게놈 클론에서 유도된 N-말단 아미노산 서열은 Edman 분해법에 의해 확인 가능한 EAS 단백질의 처음 16 아미노산과 동일하다. cEAS1을 사용한 RNA 블롯 하이브리다이제이션은 EAS mRNA 번역 활성이 유도되는 것과 일치하는 mRNA 유도 시간 경과을 보여주며, 유도 후 최대 수준은 4-6시간 후에 도달한다. 대조군 세포에서는 EAS mRNA가 검출되지 않았다. 게놈 DNA의 DNA 블롯 하이브리다이제이션 분석은 테트라플로이드 담배 게놈에서 EAS 유사 유전자의 약 12-15개의 복제 수를 나타냈다. 잠재적인 대립유전자 프레닐 이인산 결합 모티프의 보존에 대해서도 논의된다.