인간 활성화 자연 살해 세포의 확장에서 단핵구의 역할

우리는 재조합 인터루킨-2(rIL-2)로 자극된 자연 살해(NK) 세포의 확장을 위한 메커니즘을 인비트로에서 연구하였다. 정상적인 인간 말초혈액 단핵세포(PBMNC)에서 형광 활성화 세포 분리(FACS)를 통해 CD56+/CD3- 표현형(98.9% +/- 0.42%)을 가진 NK 세포 집단을 얻었다. rIL-2(1,000 U/mL)를 포함한 배지에서 NK 세포를 18일 동안 배양한 결과, 세포 수는 시작 NK 집단에 비해 2.6 +/- 0.56배 확장되었지만, 세포독성은 유의미하게 증가한 활성화 NK 세포(ANK) 집단이 생성되었다. 시작 NK 집단과 자가 PBMNC를 트랜스웰 시스템(Costar, Cambridge, MA)에서 배양하면, 두 세포 집단이 0.4 마이크론의 포어 막으로 분리되어 ANK의 확장은 용량 의존적으로 증가하였다(확장 = 19.9 +/- 4.0배; P < .001; n = 22). 이는 NK가 단독으로 배양되었을 때 관찰된 확장보다 유의미하게 더 컸다. 트랜스웰 시스템을 이용한 추가 실험에서는 자가 PBMNC가 ANK 전구체 증식에 미치는 자극 효과가 CD14+ 단핵구 분획에 존재하고(CD14+의 최대 확장 = 14.5 +/- 1.5배; n = 17) CD5+ T-림프구나 CD19+ B-림프구 분획에는 없다는 것을 보여주었다. 순수 NK 세포와 자가 단핵구를 같은 공간에서 직접 공동 배양함으로써 세포-세포 접촉이 허용되었고, 이로 인해 ANK 집단의 확장은 유의미하게 더 크게 나타났다(30.6 +/- 4.7배 확장, P < .001; n = 10). 마지막으로, CD5와 CD8을 지닌 세포를 항체로 코팅된 플라스틱 플라스크에서 팬닝하여 PBMNC에서 제거하면 NK 전구체와 단핵구가 풍부한 시작 세포 집단이 생성되었다. 이 결과 생성된 집단을 18일 동안 rIL-2 존재 하에 배양하면 FACS로 얻은 CD56+/CD3- 세포를 자가 단핵구와 공동 배양했을 때와 유사한 ANK 집단이 생성되었다. 이 결과는 ANK의 증식이 자가 단핵구를 필요로 하며 일부는 체액 인자에 의해 매개되지만, NK와 단핵구가 직접 세포-세포 접촉을 통해 더 향상된다는 것을 시사한다. PBMNC에서 CD5 및 CD8을 지닌 세포를 제거하는 것은 ANK를 대량으로 생산 가능한 시작 집단을 얻기 위한 단일 효율적인 방법이다.