칼슘 프로브와 전위 민감 염료를 이용한 분리된 심장 세포에서의 형광 및 차별 광흡수 기록

이 보고서는 미세 절개를 통해 근육 세포막이 제거된 단일 심장 세포에서의 미세 분광 광도계(optical system for microspectrophotometry)를 설명합니다. 이 시스템은 미세 절개에 사용되는 고배율 역광 현미경에 부착되어 있으며, (a) 주어진 염료나 Ca2+ 프로브의 스펙트럼을 정의하는 데 사용되는 단일 가변 파장 미세 분광 광도계와 (b) 최적 파장과 25-30 nm 떨어진 파장 간에 차별 기록하는 데 사용되는 이중 파장 차별 미세 분광 광도계가 포함됩니다. 결과는 다음의 광학 방법을 사용하여 제시됩니다: (a) 사포플라스막(SR) 막의 내면에 결합된 Ca2+의 양을 모니터링하기 위해 클로로테트라사이클린으로 형광 측정; (b) SR에서 Ca2+ 방출로 인해 발생하는 근육 세포 내 Ca2+의 변화를 측정하기 위해 아르세나조 III로 차별 흡수 측정; (c) SR의 Ca2+ 축적 중 및 Ca2+ 방출 유도 시 전에 SR 막의 전하 분포 변화를 모니터링하기 위해 전위 민감 염료인 메로시아닌 540, NK 2367, 및 다이-S-C3(5)로 형광 및(또는) 차별 흡수 측정. Ca2+ 방출 유도에 앞서 작은 빠른 신호가 관찰됩니다. 이는 클로로테트라사이클린으로 SR 내부의 Ca2+ 결합 증가로 감지되며, 전위 민감 염료로는