다중 파괴 효모 균주 구축에 있어 URA3 선택을 반복적으로 사용할 수 있는 유전자 파괴 방법

본 논문에서는 효모 유전자를 파괴하기 위해 사용한 3.8-kb 분자 구조물에 대해 설명합니다. 이 구조물은 1.1-kb 박테리아 염기서열의 직접 반복으로 둘러싸인 기능성 효모 URA3 유전자로 구성됩니다. 3.8-kb 구간을 관심 있는 복제 대상 유전자의 클론에 삽입한 다음, 통합형 변환을 통해 결과적인 파괴를 효모 유전체에 도입하는 것은 간단합니다. 파괴와 플랭킹 호모로지로 이루어진 적절한 DNA 조각은 제한 효소 소화를 통해 얻을 수 있습니다. 이러한 조각을 변환을 통해 효모에 도입한 후, 안정적인 통합체는 Ura+ 선택을 통해 분리할 수 있습니다. 이 구조물의 중요한 특징은 플랭킹 직접 반복 사이의 재조합이 채소 상태에서 자란 배양에서 높은 빈도(10(-4))로 발생한다는 것입니다. 절단 후, 반복 서열의 복사본이 하나만 남습니다. 따라서 결과적인 균주에서 Ura+ 선택을 다시 사용할 수 있으며, 이와 유사한 방식으로 두 번째 유전자를 파괴하거나 다른 목적을 위해 사용할 수 있습니다.