폴리아크릴아마이드 젤에서의 스테로이드 결합

초록 스테로이드 결합 단백질의 정량화 및 평형 결합 조건에서의 결합 상수 결정을 허용하는 방법이 설명된다. 이 방법은 정적 상태 폴리아크릴아마이드 젤이라고 하며, 방사성 스테로이드 호르몬이 혈청 테스토스테론 결합 글로불린, 코르티코스테로이드 결합 글로불린, 알부민 및 고환 안드로겐 결합 단백질에 결합하는 것을 입증하고 정량화하는 데 사용되었다. 정적 상태 젤 전기영동은 비전하 분자의 결합을 연구하는 데 사용될 수 있다. 방사성 스테로이드는 중합 전에 아크릴아마이드 용액에 용해된다. 샘플이 전기영동 중에 젤로 이동할 때, 스테로이드는 개별 단백질에 결합된다. 젤은 슬라이스되고 각 슬라이스에서 방사능이 추출되어 측정된다. 에너지 법칙은 결합 속도와 분리 속도가 같을 때 적용될 수 있다. 이는 단백질과 스테로이드 간의 결합 자리의 총 수와 해리 상수(Kd)를 결정할 수 있게 해준다. 동일한 조건에서 하나의 전기영동에서 동일 샘플 내 여러 결합 성분의 존재를 입증하고 정량화할 수 있다. 정밀도는 샘플당 0.01에서 10 pmoles 범위 내에서 만족스럽고(변동 계수 10 %), 민감도는 젤 내 스테로이드의 농도에 따라 달라진다. 방사성 스테로이드가 단백질에서 느리게 분리되는 경우, 즉 인간 및 원숭이 혈청의 테스토스테론 결합 글로불린에 대한 3Hdihydrotestosterone의 결합(t1/2 0°C에서 60분), 전기영동 전에 방사성 리간드로 단백질을 포화시켜 정확한 정량화도 수행할 수 있다. 비표지 샘플 및 표지된 스테로이드로 포화된 샘플의 정적 상태 젤 전기영동을 사용하여, 쥐 및 토끼의 고환 안드로겐 결합 단백질 농도와 토끼, 원숭이 및 인간 혈청 테스토스테론 결합 글로불린의 농도가 측정되었다.