새로운 고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석 기법을 사용한 Caco-2 단층을 통한 인체 모유 올리고당의 인 비트로 수송 조사

복합 유당 유래 올리고당은 인체 모유의 주요 성분에 속하며, 모유를 먹는 유아에게 여러 기능을 발휘하는 것으로 믿어집니다. 따라서 우리는 Caco-2 단층에서 인체 모유 올리고당의 세포간 수송을 조사했습니다. 세포의 정수측 또는 세포내 구획에서의 주요 인체 모유 올리고당(HMOs)은 Hypercarb(TM) 컬럼을 이용한 고성능 액체 크로마토그래피로 분리되었고, 질량 분석기로 온라인 분석되었습니다. 이 방법은 사전 정제 없이 세포내 및 세포외 분획에서 이러한 성분의 확인과 정량화를 가능하게 했습니다. 이 기법을 사용하여 산성 및 중성 HMOs가 상피 장벽을 통과함을 보여줄 수 있었습니다. 중성 올리고당의 세포간 플럭스는 온도에 민감하며, 브레펠디닌 A와 바필로마이신 A에 의해 부분적으로 억제되었습니다. 또한, 정수측에서 세포간 구획으로의 순 유속은 중성 성분에서만 관측되었습니다. 마찬가지로, 정수측 세포의 섭취는 중성 성분에서만 발견되었고 산성 올리고당에서는 발견되지 않았습니다. 중성 HMOs의 세포내 농도는 브레펠디닌 A, N-에틸말레이미드 또는 바필로마이신 A와 같은 세포간 이동 억제제에 의해 유의하게 증가했습니다. 세포의 섭취는 포화 가능성이 있었고, 락토-N-푸코펜타오스 I에 대한 겉보기 K(m)은 1.7 +/- 0.1 mmol/liter, 락토-N-테트라오스에 대해서는 1.8 +/- 0.4 mmol/liter로 측정되었습니다. 또한, 락토-N-푸코펜타오스 II의 추가로 락토-N-푸코펜타오스 I의 섭취를 억제할 수 있었지만, 락토-N-테트라오스에 의해서는 억제되지 않았습니다. 이 발견들은 중성 HMOs가 수용체 매개 세포간 이동뿐 아니라 세포간 경로를 통해 장 상피를 가로지르는 반면, 산성 HMOs의 이동은 오직 세포간 유속만을 나타낸다고 제안합니다.