친화성 정제된 c-Jun 아미노 말단 단백질 키나아제는 활성을 위해 세린/스레오닌 인산화가 필요하다.

포르볼 에스터를 U937 백혈병 세포에 추가하면 c-Jun의 세린 63 및 73에서 인산화가 촉진된다. 이 인산화를 자극하는 단백질 키나제를 분리하기 위해 헤파린-세파로스 크로마토그래피와 글루타티온-세파로스 비즈에 결합된 글루타티온 S-전이효소와 c-Jun의 아미노산 5-89의 융합 단백질(GST-c-Jun)을 통한 친화 크로마토그래피를 사용하였다. 이 절차를 사용하여 GST-c-Jun 및 전체 c-Jun 단백질을 인산화할 수 있는 67-kDa 단백질을 정제하였다. 세린 63 및 73에서 돌연변이를 생성한 후 GST와 결합된 융합 단백질(GST-c-Jun mut)을 생성하여 이 단백질 키나제가 c-Jun 아미노 말단의 이러한 부위들을 특이적으로 인산화함을 입증하였다. 정제된 c-Jun 아미노 말단 단백질 키나제(cJAT-PK)에 인산가수분해효소 2A를 처리하면 GST-c-Jun을 인산화하는 능력이 억제된다. 이 비활성화된 효소는 단백질 키나제 C(PKC)로 인산화하여 재활성화할 수 있지만, PKC는 GST-c-Jun 기질을 인산화할 수 없다. v-Jun은 생체 내에서 인산화될 수 없기 때문에, cJAT-PK의 GST-v-Jun 또는 GST-c-Jun mut에 대한 결합 능력을 비교하였다. cJAT-PK는 GST-v-Jun보다 GST-c-Jun mut에 50배 더 잘 결합하여 v-Jun에서 결핍된 델타 도메인이 cJAT-PK의 결합에 역할을 한다는 것을 시사한다. 이러한 결과는 c-Jun 인산화를 조절하는 단백질 인산가수분해효소와 PKC에 의해 매개되는 단백질 키나제 캐스케이드가 존재함을 나타낸다.