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배경: PCR을 통한 Plasmodium falciparum 기생충 수의 정확한 정량화는 항말라리아제로 감염된 후 치료받는 대상자의 성장 동역학을 모니터링하기 위한 중요한 도구입니다. 방법: 18S rRNA 유전자를 표적으로 하는 프라이머와 가수분해 탐침을 사용하는 실시간 정량 PCR(rt-qPCR) 방법이 혈액 샘플의 기생충 하중을 추정하기 위해 조정되고 최적화되었습니다. 샘플에는 다양한 기생충 농도(6.4 × 10(5)에서 500μl의 포장 적혈구(500pRBC)당 6.4 기생충까지)의 실험실에서 준비된 혈액 샘플과 10일 동안 19개의 시간에 걸쳐 실험적으로 감염된 인간 주체에서 수집된 혈액 샘플이 포함되었습니다. 샘플 준비 및 추출, 검출 화학, 분석 재현성 및 검출 한계는 이전에 발표된 말라리아 백신 임상 시험에서 사용된 SYBR Green rt-qPCR과 비교되었습니다. 결과: rt-qPCR 가수분해 탐침 분석과 SYBR Green rt-qPCR 모두 500pRBC당 6.4 × 10(1) 기생충의 검출 한계를 제공했습니다. 그러나 SYBR Green rt-qPCR 분석에서의 비특이적 증폭은 500pRBC당 6.4 × 10(2) 기생충 이하의 하중에 대한 부정확한 추정으로 이어졌으며, 음성 샘플에서 기생충의 위양성 검출로 이어졌습니다. rt-qPCR 가수분해 탐침 분석은 특이적이며 500pRBC당 6.4 × 10(1) 기생충까지 신뢰할 수 있는 기생충 혈증 정량화를 제공했습니다. 특히, 실험적으로 감염된 주체에서 수집된 19개의 연속 샘플 중 12개가 500pRBC당 6.4 × 10(2) 복사본 이하였습니다. 결론: 이러한 결과는 가수분해 탐침 rt-qPCR 분석이 인간 혈액 샘플에서 P. falciparum의 정량화에 있어 SYBR Green rt-qPCR보다 우수하다는 것을 보여줍니다. 가수분해 탐침 rt-qPCR은 현재 퀸즐랜드 소아 감염병 실험실(QPID)에서 실험적으로 감염된 임상 시험 대상자의 기생충 혈증 모니터링에 사용되고 있습니다.
Rockett 외 (Mon,)가 이 질문을 연구했습니다.