생체옵신의 특정 아미노산 치환: 변화된 코돈을 포함하는 합성 DNA 조각으로 구조 유전자의 제약 조각 교체

광의존 양성자 이동 메커니즘을 연구하기 위해, 우리는 유전자에 단일 코돈 변화를 도입하여 단백질에 다음과 같은 특정 아미노산 치환을 생성했습니다: Tyr-185를 Phe로, Pro-186을 Leu로, Trp-189를 Phe로, Ser-193을 Ala로, 그리고 Glu-194를 Gln으로. 이 전략은 수정된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 합성 DNA 이중 나선으로 62 염기쌍 제한 조각을 교체하는 것을 포함했습니다. 이는 Ile-203에서 특정 제한 부위(Xho I)를 생성해야 했으며, 이는 올리고뉴클레오타이드 유도 점 돌연변이에 의해 만들어졌습니다. 수정된 본래 및 변종 제한 조각에 해당하는 여섯 개의 DNA 이중 나선은 모두 화학적으로 합성된 디옥시리보올리고뉴클레오타이드의 DNA 리가제 촉진 결합에 의해 준비되었습니다. 합성 DNA 조각을 사용하여 재구성된 생체옵신 발현 플ASMID는 제한 분석과 DNA 서열 결정으로 특성화되었습니다. 합성 올리고뉴클레오타이드와 DNA 조각의 정제를 위한 매우 빠르고 효율적이며 일반적인 방법이 개발되었습니다.