تفعيل ATP لهولوإنزيم بوليميراز DNA III لبكتيريا Escherichia coli. I. تشكيل معقد بدء معتمد على ATP مع قالب مفعل.

يحفز ATP (أو dATP) تخليق DNA بواسطة هولوإنزيم بوليميراز DNA III (هولوإنزيم) على قالب البدء الاصطناعي poly(dA).oligo(dT)12. الببتيدات غير القابلة للتحلل المائي من ATP وغيرها من (ديوكسي)ريبونوكليوسيد ثلاثي الفوسفات الطبيعية غير نشطة. نظرًا لأن النظير غير القابل للتحلل المائي 5'-ديوكسي أدينيل يليميدوديفوسفات يتم استخدامه بكفاءة من قبل الهولوإنزيم للإدماج، يمكن تحديد متطلبات ATP (أو dATP) لتفعيل استنساخ DNA الطبيعي. أظهر تحليل أوقات التأخير في تخليق DNA وعزل الدرجات الوسيطة أن ATP (أو dATP) مطلوب في تشكيل معقد بدء بين الهولوإنزيم وقالب DNA المفعل، ولكن ليس لتخليق DNA اللاحق. يتم ربط ATP بالهولوإنزيم في غياب DNA بقيمة KD قدرها 0.8 ميكرومتر؛ يتم ربط من 2 إلى 3 جزيئات من ATP لكل جزيء من الهولوإنزيم دون ترابط ظاهر. ربط ATP ببوليميراز DNA III (الهولوإنزيم ناقص الوحدة الفرعية بيتا) ضعيف (KD أكبر من 5 ميكرومتر) ولم يتم ملاحظة الربط مع الوحدة الفرعية بيتا وحدها. ومع ذلك، فإن الهولوإنزيم الذي تم إعادة تكوينه عن طريق خلط بوليميراز DNA III مع الوحدة الفرعية بيتا يربط ATP بشدة (KD = 0.6 ميكرومتر) كما هو الحال في الهولوإنزيم الأصلي.