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변형 뉴클레오타이드를 식별하고 RNA 분자 내에서 그 위치를 파악하는 것은 어려운 작업입니다. 정제된 RNA 분자의 직접 염기서열 분석과 정제된 RNA 조각에 대한 고성능 액체 크로마토그래피 질량 분석만이 길이가 50-150 nt인 RNA 내에서 특정 변형 뉴클레오타이드의 유형과 위치를 결정할 수 있게 합니다. 이 장의 목표는 알려진 서열의 RNA 내에서 변형 뉴클레오타이드의 검출, 위치 추적 및 정량에 특히 적합하다고 판단되는 몇 가지 간단한 절차를 자세히 설명하는 것입니다. 이 방법은 특정 RNA 변형 효소의 효소 활성도 in vitro 또는 in vivo에서 밝혀내는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차는 방사성 표지 RNA(32P, 14C 또는 3H 사용) 또는 32P-후방식별 올리고뉴클레오타이드와 셀룰로오스 판에서 표지된 뉴클레오타이드의 2차원 얇은 층 크로마토그래피를 기반으로 합니다. 이 장은 얇은 층 셀룰로오스 판에서 70개의 변형 뉴클레오타이드의 이동 특성에 대한 유용한 지도를 제공합니다.
Grosjean 외 (목요일,)은 이 질문을 연구했습니다.