Purificação e propriedades da xantina desidrogenase do leite.

A xantina oxidase (XO) do leite foi preparada em uma forma de desidrogenase (XDH) ao purificar a enzima na presença de 2,5 mM de ditiotretol. Ao contrário da XO, que reage rapidamente apenas com oxigênio e não com NAD, a forma XDH da enzima reage rapidamente com NAD. A XDH tem um número de rotatividade para a conversão dependente de NAD da xantina em urato de 380 mol/min/mol a pH 7,5, 25 graus C, com Km = ≤ 1 microM para xantina e Km = 7 microM para NAD, mas tem uma atividade dependente de O2 muito baixa. Há evidências de que as duas formas da enzima possuem ambientes de flavina diferentes: a XDH estabiliza a forma neutra da semiquinona de flavina e a XO não. Além disso, a XDH liga o flavina artificial 8-mercapto-FAD em sua forma neutra, deslocando o pK dessa flavina em 5 unidades de pH, enquanto a XO liga 8-mercapto-FAD em sua forma aniónica benzoquinóide. A XDH pode ser convertida de volta para a forma XO pela adição de três a quatro equivalentes do reagente formador de dissulfeto 4,4'-ditiodipiridina, sugerindo que, na forma XDH da enzima, as ligações de dissulfeto são quebradas; isso pode causar uma mudança conformacional que cria um local de ligação para NAD e muda a estrutura da proteína próxima à flavina.