Identificação do Complexo de Proteínas Associadas ao Tumor de Wilms 1 e Seu Papel no Splicing Alternativo e no Ciclo Celular

A proteína associada ao tumor de Wilms 1 (WTAP) é um regulador de splicing putativo que se acredita ser necessário para a progressão do ciclo celular através da estabilização do mRNA da ciclina A2 e do desenvolvimento embrionário precoce de mamíferos. Para entender melhor como a WTAP atua no contexto da maquinaria celular, identificamos suas proteínas interagentes em células endoteliais da veia umbilical humana e células HeLa usando proteômica shotgun. Aqui, mostramos que a WTAP forma um novo complexo proteico incluindo Hakai, homólogo de Virilizer, KIAA0853, RBM15, as proteínas ricas em arginina/serina BCLAF1 e THRAP3, e certos reguladores gerais de splicing, a maioria dos quais tem papéis relatados na regulação pós-transcricional. A depleção desses respectivos componentes do complexo resultou em redução da proliferação celular junto com acumulação de G2/M. O knockdown duplo das proteínas ricas em serina/arginina (SR) BCLAF1 e THRAP3 por siRNA resultou em uma diminuição na localização nuclear do WTAP, enquanto os speckle nucleares permaneceram intactos. Além disso, encontramos que o complexo WTAP regula o splicing alternativo do pré-mRNA de WTAP promovendo a produção de uma isoforma truncada, levando a uma mudança na expressão da proteína WTAP. Coletivamente, essas descobertas mostram que o complexo WTAP é um novo componente da maquinaria de processamento de RNA, implicando um papel importante tanto no controle pós-transcricional quanto na regulação do ciclo celular.