Comparación cuantitativa de técnicas de aislamiento de leucocitos mononucleares intestinales humanos para análisis por citometría de flujo

Se necesitan estudios sobre células inmunitarias derivadas del intestino humano para entender la patogenia de las enfermedades gastrointestinales y desarrollar nuevas estrategias de tratamiento. Las técnicas de aislamiento para extraer estas células inmunitarias del tejido intestinal se basan en gran medida en estudios murinos y los datos comparativos sobre el aislamiento del intestino humano son escasos. En este estudio evaluamos el rendimiento celular, la viabilidad y la expresión de moléculas de superficie en leucocitos mononucleares, comparando tres técnicas para obtener una suspensión celular inmunitaria única del intestino humano; bajas concentraciones de las enzimas Colagenasa D o Liberase TL, y disociación mecánica sin enzimas con el Medimachine. Ambas técnicas de aislamiento enzimático proporcionaron un mayor rendimiento celular que la disociación mecánica. La expresión de moléculas de superficie permaneció intacta después del tratamiento con Colagenasa D, mientras que la digestión con Liberase TL resultó en una fuerte disminución de la expresión del receptor CD4. En conjunto, la digestión con Colagenasa D proporciona el mayor rendimiento de células mononucleares mientras mantiene intacta la expresión de moléculas de superficie.