Un método fácil para la eliminación de contaminantes de ARN de doble cadena (dsRNA) de ARN mensajero (ARNm) transcrito in vitro

La creciente importancia del ARN mensajero transcrito in vitro (ARNm IVT) para la síntesis de la proteína terapéutica codificada in vivo exige la fabricación de productos de ARNm puros. El contaminante principal en el ARNm IVT es el ARN de doble cadena (dsRNA), un subproducto de la transcripción que solo se puede eliminar mediante un procedimiento engorroso que requiere instrumentación especial y genera desechos peligrosos. Aquí presentamos un método alternativo simple, rápido y rentable que involucra solo técnicas de laboratorio estándar. La purificación del ARNm IVT se basa en la unión selectiva del dsRNA a la celulosa en un amortiguador que contiene etanol. Demostramos que al menos el 90% de los contaminantes de dsRNA se pueden eliminar con una buena tasa de recuperación, >65%, independientemente de la longitud, la secuencia codificante y la composición de nucleósidos del ARNm IVT. El procedimiento es escalable; la purificación de cantidades de microgramos o miligramos de ARNm IVT es alcanzable. Al evaluar el impacto de la purificación de ARNm in vivo en ratones, se pudo medir un aumento en la traducción de los transcritos administrados, incluido el ARNm IVT que contiene 1-metilpseudouridina, que ya no indujo interferón (IFN)-α. La eliminación basada en celulosa de contaminantes de dsRNA es un método efectivo, confiable y seguro para obtener ARNm IVT de alta pureza adecuado para aplicaciones in vivo.