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여기에서는 CRISPR 관련 단백질 12a-하이브리드화 사슬 반응(CRISPR/Cas12a-HCR) 시스템과 중합효소 연쇄 반응/재조합 효소 보조 증폭(PCR/RAA) 기술을 결합하여 Salmonella 검출 방법을 제시합니다. 이 접근법은 Salmonella invA 유전자를 생물인식 요소로 사용하고 PCR 및 RAA를 통해 그 유전자를 증폭하는데 의존합니다. 표적 유전자가 존재하는 경우, crRNA에 의해 안내된 Cas12a가 증폭 생성물을 인식하고 절단하여 HCR을 시작합니다. 형광 표지된 단일 가닥 DNA(ssDNA) H1 및 H2가 도입되었으며, Salmonella 농도는 유도된 HCR에서의 형광 강도를 기반으로 결정되었습니다. 두 시험 모두 높은 특이성, 감도, 단순성 및 신속성을 보여주었습니다. 검출 범위는 2 × 10^1–2 × 10^9 CFU/mL였으며, LOD는 20 CFU/mL였고, 전체 과정은 85–105분 이내에 특정하고 신속한 Salmonella 검출을 가능하게 했습니다. 두 가지 시험을 사용하여 양 모와 소 샘플에서 현장 수확 시험이 수행되었고, 동물 유래 식품에서 만족스러운 회수율과 정확성을 입증했습니다. CRISPR/Cas12a와 하이브리드화 사슬 반응 기술을 결합함으로써, 이 연구는 병원균 식별 및 식품 안전 모니터링에 중요한 신속하고 민감한 Salmonella 검출 방법을 제시합니다.
Wang et al. (목요일,)이 이 질문을 연구했습니다.