Plataforma de Microfluídica Versátil para Microscopia de Super-Resolução Multialvo Aprimorada

A Acumulação de Pontos Baseada em DNA para Imagem em Topografia Nanoscalar (DNA-PAINT) é uma variante poderosa da microscopia de localização de moléculas únicas (SMLM) que supera as limitações de fotodegradação, oferece seleção flexível de fluoróforos e permite controle fino dos parâmetros de imagem através de cinéticas de ligação ajustáveis. Sua característica mais distintiva é a capacidade de multiplexação, geralmente implementada por meio de imagens sequenciais de alvos usando um Exchange-PAINT. Esta técnica envolve a atribuição de fitas de DNA ortogonais a diferentes alvos dentro de uma amostra e, em seguida, a adição e remoção sequencial de fitas de imaginadores complementares que são específicas para apenas um alvo por vez. No entanto, os fluxos de trabalho manuais de Exchange-PAINT muitas vezes são ineficientes, propensos a deriva e variabilidade, e carecem de reprodutibilidade. Aqui, introduzimos um sistema de microfluídica acionado por ar comprimido, projetado especificamente para SMLM multiplexado. Com um design empilhável e modular que, em princípio, não é limitado pelo número de canais, o sistema garante troca de buffer robusta, reprodutível e eficiente em material, com volume residual mínimo. Opera em modos manual e automatizado e pode ser prontamente adaptado a uma ampla gama de microscópios comerciais e personalizados, incluindo campo amplo, confocal, STED, MINFLUX e outras plataformas. Demonstramos imagens robustas de Exchange-PAINT 5-plex em células cancerosas U2OS e, importante, estabelecemos imagens nanosclares multiplexadas em cardiomiócitos primários frágeis. Essas aplicações demonstram que a plataforma permite multiplexação de super-resolução confiável em sistemas fisiologicamente relevantes e apoia análises detalhadas em nanoscale em células primárias complexas.