A RPA estimula diretamente a processividade da helicase Mer3 para garantir a formação normal de cruzamentos na meiose

A formação de cruzamentos meióticos é crítica para gerar gametas viáveis e aumentar a diversidade genética. A helicase Mer3 (HFM1 em humanos) é um fator altamente conservado essencial para promover cruzamentos e garantir sua distribuição adequada. Aqui, identificamos a proteína de replicação A (RPA) como um interator direto da Mer3 de levedura. Demonstramos que essa interação é conservada entre o HFM1 humano e a RPA. Espectrometria de massa por ligação cruzada e modelagem estrutural com AlphaFold2 revelam uma interface Mer3-RPA conservada e específica. Ensaios com pinças magnéticas de moléculas únicas demonstram que a interação direta com a RPA é necessária para a processividade da helicase Mer3 sob condições de baixa tensão de DNA. De maneira consistente, uma mutante mer3 deficiente em ligação à RPA apresenta frequências de cruzamento reduzidas e acumula intermediários de recombinação não resolvidos durante a meiose de levedura. Através de experimentos de localização em todo o genoma, vinculamos esse efeito ao recrutamento enfraquecido da mutante mer3 aos locais de quebras de fita dupla. Nossos achados fornecem insights mecanísticos sobre a coordenação da recombinação meiótica pela helicase Mer3 por meio de interações com a maquinaria canônica de reparo de DNA, destacando um mecanismo conservado subjacente ao controle de cruzamentos durante a reprodução sexual.