Identificação sexual do pireto do sol (Aratinga solstitialis) usando amplificação isotérmica mediada por loop dos cromossomos W e Z do spindlin

Contexto e Objetivo: O pireto do sol (Aratinga solstitialis), uma ave pertencente à família Psittaciformes, é um animal de estimação popular devido à sua cor vibrante e aparência bonita. O pireto do sol é uma ave monomórfica com aparências semelhantes entre machos e fêmeas, tornando a identificação sexual difícil pela observação da morfologia externa. Portanto, técnicas moleculares são utilizadas. A amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) é uma técnica molecular que é frequentemente aplicada para a identificação sexual em aves e é um método rápido e simples que pode ser usado em campo. Este estudo utilizou a técnica LAMP para melhorar a identificação sexual em piretos do sol observando a mudança de cor do azul hidroxinaftol. Materiais e Métodos: Dois conjuntos de primers, SunSpin-W e SunSpin-Z, foram projetados para a identificação sexual em piretos do sol usando a técnica LAMP específica para o gene spindlin. A reação LAMP desenvolvida foi testada para condições ótimas, sensibilidade e especificidade em comparação com a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: O conjunto de primers SunSpin-W amplificou apenas aves fêmeas, enquanto o conjunto de primers SunSpin-Z amplificou DNA de aves machos e fêmeas. Os conjuntos de primers foram otimizados a 62°C por 45 min. Um resultado positivo foi visível a olho nu a partir da mudança de cor da reação. No ensaio LAMP, a menor concentração detectável foi de 10 pg/μL e no ensaio PCR foi de 1 ng/μL, enquanto uma taxa de precisão de 100% na identificação sexual foi observada ao comparar os resultados do ensaio LAMP com o ensaio PCR. Conclusão: Este estudo desenvolveu com sucesso uma técnica LAMP para identificação sexual de piretos do sol, que levou 45 min para ser concluída e pode ser expandida para uso em campo. Palavras-chave: amplificação isotérmica mediada por loop, identificação sexual, gene spindlin, pireto do sol.