Imagens In Vivo Multiplexadas com Tags Moduladoras de Tempo de Vida da Fluorescência

Resumo A microscopia de imagem por tempo de vida da fluorescência (FLIM) abre novas dimensões para imagens altamente multiplexadas em células vivas e organismos, utilizando diferenças no tempo de vida da fluorescência para distinguir sondas fluorescentes espectralmente idênticas. Aqui, um conjunto de tags (FASTs) ativadoras de fluorescência e deslocadoras de absorção capazes de modular o tempo de vida da fluorescência de derivados fluorogênicos de 4-hidroxibenzilideno rodanina (HBR) é descrito. Mostra-se que mudanças na sequência da proteína FAST podem variar o ambiente local do cromóforo e levar a mudanças significativas no tempo de vida da fluorescência. Essas tags moduladoras de tempo de vida da fluorescência possibilitam a imagem multiplexada de até três alvos em um canal espectral usando um único derivado de HBR em células vivas e larvas de zebrafish vivas. A combinação de multiplexação de tempo de vida da fluorescência com multiplexação espectral permite a imagem bem-sucedida de seis alvos em células vivas, abrindo grandes perspectivas para multiplexação multicolorida de tempo de vida da fluorescência.